科研小白如何摸索自己的预实验

科研小白如何摸索自己的预实验
无论是学术大牛还是科研小白,在接触一个新课题时,往往是三个步骤:
首先,阅读大量相关文献,设计出自己的实验方案。然后,摸索预实验,获得一些经验和数据。最后,根据这些资料,决定是否推进正式试验。
其中,很重要的预实验不仅能节约实验经费,减少人力物力支出,最重要的是,能让你在做正式试验时「手儿不抖,稳如老狗」。

因此,今天给大家分享一下如何摸索自己的预实验。

科研小白如何摸索自己的预实验
图片来源:站酷海洛 Plus
首先,预实验必须要当做正式实验来对待(态度要放端正,这是必须的)

预实验的每一步都需要详细规划,多方筹谋。不论是实验动物的选择,还是检测试剂的购买,都尽量和正式实验统一标准。

建议大家先把所有试剂和药物购买完毕后,再去购买实验动物。

因为动物会长胖,长胖后给药剂量就要增加,不仅多花钱,并且还容易影响实验效果。

笔者曾经提前将实验动物买回,但因为特殊原因没能购买到造模药物,最终只能忍痛割爱将动物赠送他人,白白亏了一笔血汗钱(那批老鼠在我这儿白吃白喝长得太胖,没办法用作造模)
动物及试剂购买
首先需要考虑:实验动物品种、体重、性别、周龄(通常根据既往文献报道可以获得答案)、数量(需要考虑到实验有一定动物死亡率或者动物本身会打架互殴,因此需要提前购买足够的动物)
动物购买的途径、安置的地点,饮食管理(一般实验室会有动物房,也可以从其他地方购买),动物免疫证明、伦理证明需要提前准备好。
实验相关的试剂和药物:

比如造模药物和器械,动物干预所需药物,阳性药物选择及购买(有些药物购买很困难,必须通过特殊程序才能买到)。如果涉及到有创操作,要提前准备好麻醉药物(麻药建议提前购买),手术器械。
需要了解自身实验平台能完成哪些技术(常见的有组织病理染色、Western Blot、PCR 等),实验仪器是否需要预约使用。
如果需要外送生物公司检测,需要提前联系好商家,以及了解清楚样本如何获取,如何运输。
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饲养动物及干预
动物购买后需要将时间节点提前规划好比如,第一周需要做什么?测量体重?观察饮食?测量需要的指标?

中间有无特殊操作?比如灌胃、测量体重、做 CT 检测、取血?……

第几周取材?取材需要哪些组织?

预实验方案就要提前设计清楚以上内容。
取材及样品准备
取材需要提前到动物房禁食、称体重、取出动物、手术器械的消毒、组织固定所需要的试剂和 EP 管,Western Blot 和 PCR 所需要的样本储存条件。

比如冻存管、EP 管,是否需要冰块?是否需要液氮?取材当天需要多少人?是否需要请人帮忙?

如果所需要取出的样本较多,建议大家请人一起帮忙,流水线作业,这样能节省时间,并且能最大程度保证样品的质量。

如果请人,每个人需要负责哪一板块的工作,比如谁负责麻醉,谁负责取血液,谁负责取器官,谁负责拍照、谁负责器官储存,都需要提前规划交代清楚。
实验指标检测
如果是需要自己做的检测,比如常见的 Western Blot 、PCR,建议提前可以看看教程(无论是视频还是贴吧,都要自己多方参考)

有了一定的理论基础后,再向老师、师兄师姐学习经验和技术,如果实验平台的仪器需要提前预约,建议提前规划好使用的时间。
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图片来源:站酷海洛 Plus
反复总结寻找答案
在整个预实验的过程中可能会出现很多问题。比如造模效果欠佳、灌胃操作不当、腹腔注射操作失误、麻醉药物使用不当等引起动物死亡。
每遇到问题都需要自己想办法解决,可以从导师、师兄师姐、文献、贴吧、视频教程等找到答案。
比如笔者曾遇到同样的麻醉药物给药,发现有的大鼠麻醉得很深,有的大鼠还活蹦乱跳,在反复尝试调整麻药浓度,给药剂量,更换麻醉方式,后来才发现是动物体重秤的准度有问题,导致体重秤得不准。
因此,需要自己反复琢磨到底是实验过程中哪一个环节出现问题,逐一排除。也要求在每一个实验步骤需要标准化,统一化,尽可能的排除干扰因素,这样方便在遇到问题最快的找到答案。
同时,建议每日总结,大到动物死亡原因分析,小到今日灌胃操作耗时多长时间。建议反复总结出每天实验的优缺点。
做任何一个操作之前,建议提前脑海中反复模拟,准备好相关工具和试剂,避免临用之际缺枪少药的,影响实验操作节奏和个人心情。
笔者曾经灌胃操作的时候发现药物竟然忘带了,只好重新回实验室准备,那真叫一个郁闷。
仔细记录每日实验过程
无论是硕士还是博士,导师给我们上的第一堂课往往就是交代我们要详细记好实验记录,只要是和实验相关的,无论是照片,还是文字,必须要及时事无巨细地详细记录。

并且要备份好每一份实验记录。

我个人一般喜欢每天及时地记在「科研实验记录本」上面,然后拍照扫描成电子版储存在电脑和云端。
时间规划
首先,个人是不赞同每天 24 小时泡在实验室的,我比较推崇的是高效率。
建议提前一天规划好第二天需要做的事情,按照代办事项的格式逐条列出,哪一个时间段需要做什么事情?
这样的好处有两点,一个是自己提前把时间预约好,可以留出足够的时间休息和娱乐;另一个是在执行计划的时候往往会有一种时间紧迫感,办事起来往往更高效且不会遗漏。
总之,预实验就是迷你版正式实验,希望小伙伴们在进行预实验的时候一定要尽可能地准备周全,这样才能最快的推进正式实验。

科研小白如何摸索自己的预实验
内容策划:Hebe
封面来源:站酷海洛 Plus
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