转染实验总失败,或许你该试试这个...

细胞转染作为细胞生物学和分子生物学常用的技术手段,稍不小心就会出错:要么转染效率低,要么细胞毒性大,影响后续实验进行,眼看着自己的实验离出成果总是差了那么一点…接连几次不理想的转染效率简直会让人崩溃~~因为失败的实验消耗的不仅是科研人的时间和心血,还费钱!

如何解决呢?板凳摆上,西瓜切好:解决的办法说起来很简单,选择正确的转染试剂!

我们知道,脂质体细胞转染因其转染效率高、重复性好的特征几乎适用于所有细胞。但文献表明脂质体转染中脂质体本身会参与细胞生理活动会造成基因表达的差异性造成细胞毒性。细胞毒性往往意味着影响细胞生理活动,对实验数据产生严重干扰,甚至影响研究结论。

一个专业的基因转导公司——SignaGen 的研究人员完美的解决了这个问题,不同于市场上常见的脂质体转染试剂是通过物理包裹 DNA 从而形成复合物达到转染的目的,SignaGen 的 PolyJet 转染试剂则是高分子阳性电荷聚合物,靠电荷引力同带负电的核酸形成复合物,在提高转染效率的同时,又大大的降低了细胞毒性。

牛 X 的 SignaGen 研究人员利用这项专利技术,推出了可生物降解的高分子聚合物的 DNA 转染试剂——PolyJet。它能对 HEK293, COS-7, NIH-3T3, HeLa, CHO 细胞以及更广范围难转染的哺乳细胞,确保高效、可重复性的转染结果。

室温下,PolyJet™ 试剂在一个非常低的浓度,能固定 DNA 在电泳过程中的迁移,并在 5 分钟之内形成转染复合物。该试剂的一个显著特征是在转染复合物内吞之后能快速完全降解掉,细胞毒性低。

PolyJet™ 试剂,1.0 mL,能在 24 孔板中足够完成 600~1,200 次转染,或者在 6 孔板中足够完成 300~600 次转染,是用于各种常用细胞系和难以转染的哺乳动物细胞系的一个价格优惠的替代产品。

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Figure 1. A Cartoon Showing Biodegradation of PolyJet™ DNA Transfection Reagent After Endocytosis of Transfection Complex

围观实例

PolyJet™ 转染试剂和 Lipofectamine Plus 转染试剂对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞转染效率的比较。

分别使用 PolyJet™(左图)和 Lipofectamine Plus(右图)将 HA 标记的 β 微管蛋白 cDNA 转染入中国仓鼠卵巢细胞。异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗 HA 标记的抗体被用来结合 HA-β 微管蛋白(绿色),DM1a 抗体被用来检测内源性的 β 微管蛋白, 它连接着罗丹明标记的二抗(红色)探针。上述图片是由德克萨斯州休斯顿医学院(University of Texas at Houston Medical School)的 Dr. Shang Yin 友情提供的。

PolyJet™ 试剂和一款领先产品 Lipofectamine 2000 对 HEK293FT 细胞染效率的比较。

分别使用 PolyJet™(左图)和 Lipofectamine 2000(右图)将 GFP 载体(pEGFPN3)转染入 HEK293FT 细胞。转染 24 小时后,通过尼康 Eclipse 荧光显微镜检查细胞的转染效率。

PolyJet™ 试剂和市场主导品牌产品 Lipofectamine 2000 对 HepG2 细胞转染效率的比较。

分别使用 PolyJet™(左图)和 Lipofectamine 2000(右图)将 GFP 载体(pEGFPN3)转染入 HepG2 细胞。转染 24 小时后,通过尼康 Eclipse 荧光显微镜检查细胞的转染效率。

PolyJet™ 和 FuGene HD 对 MDCK 细胞染效率的比较。

分别使用 PolyJet™(左图)和 FuGene HD(右图)按照生产制造商的科学实验步骤将绿色荧光蛋白(GFP)DNA 转导入 MDCK 细胞。转染 48 小时后,在荧光显微镜下观察 GFP 和 DAPI 染色。上面的图片是由 NYU 医学中心的 Ge Zhou 博士友情提供的。

PolyJet™试剂和市场主导品牌产品 Lipofectamine 2000 对 MDCK 细胞转染效率的比较。

MDCK 细胞是较难转染的细胞系。使用我们专有的细胞转染操作程序,PolyJet™(左图)能高达 70% GFP 阳性细胞对比 Lipofectamine 2000(右图)大约 5% 的阳性效率。分别使用由 PolyJet™(左图)和 Lipofectamine 2000(右图)将 GFP 载体(pEGFPN3)转染入 MDCK 细胞。转染 36 小时后,通过尼康 Eclipse 荧光显微镜检查转染效率。

PolyJet™ 试剂同市场主导品牌产品之一 Fugene HD 对 LNCap 细胞转染效率的比较。

分别使用 PolyJet™(左图)和 Fugene HD(右图)将 GFP 载体(pEGFPN3)转染入 LNCap 细胞。转染 24 小时后,通过尼康 Eclipse 荧光显微镜检查转染效率。

PolyJet™ 试剂对神经细胞系 Neuro2A 有较高的转染效率。

使用 PolyJet™ 体外 DNA 转染试剂将 pEGFPC1 质粒转染入 Neuro2A 细胞。转染 24 小时后,通过尼康 Eclipse 荧光显微镜观察 Neuro2A 细胞的 DIC 影像(左)和荧光影像(右)。

PolyJet™ DNA 体外转染试剂和 Lipofectamine 2000 在原代小鼠皮肤成纤维细胞上的细胞毒性的比较。

小鼠成纤维细胞与指定的转染试剂/pEGFPC1(DNA)混合物在无血清 DMEM 高糖培养基孵育 4 小时, 然后用全血清培养基替代。转染 24 小时后,细胞的尼康 Eclipse 荧光显微镜 DIC 相位成像图。

围观群众纷纷叫好:

PolyJet Transfection Reagent worked equally as well as lipofectamine 2000, with little evidence of cell death on 293, PC-3 and 22RV1 cells. I will defiantly consider switching over.

-----Tiffany Wallace, Ph.D., June 9, 2009, NCI / NIH

I only did side by side with the testing sample (PolyJet) and Lipo2000 with GFP transfection on COS-7 cells. The result was very good. PolyJet was even better than L2K.

------Feng Qiao, Ph.D., Jun 12, 2009, NEI / NIH

I tested the sample of PolyJet on my NIH-3T3 mouse fibroblasts this weekend. The results were much better than Lipofecatmine LTX. I'm attaching a powerpoint slide with my results (I did not quantify the % transfection efficiency, but the pictures get the point across). I found that the protocol for difficult-to-transfect cell lines worked better than the standard protocol.

-----Stephanie Murphy, Ph.D., June 29, 2009, Dartmouth College

I had chance to try your product finally. It was great success. I used HeLa cells and got 10% transfection efficiency (<0.1% for Lipofectamine). Thank you! I was wondering if I also try GenJet™ Plus DNA In Vitro Transfection Reagent? According to your website, the reagent works better than regular PolyJet.

-------Yumi Uetake, Ph.D., August11, 2009, UMASS

I tested PolyJet and it looks great on MDCK. We placed order. Thank you!

-------Ge Zhou, Ph.D., August 12, 2009, NYU

We are happy to provide feedback. PolyJet worked very well for us in HepG2 cells, we got approximately 80% efficiency with pMAX GFP plasmid, by following the conditions in your suggested protocol. We ran a comparison with Lipofectamine, which only showed approximately 20-30% transfection efficiency. We are planning experiments and will be ordering more soon.

-------Emily Mcallister, September 3rd, 2009, PBRC

(敲黑板)还有重要的一点:价   格   便   宜!1,380 元/毫升,跟动辄 3、4 千元的试剂比起来,价格低的不像话。吃瓜小伙伴们是不是觉得以前的试剂买贵了?

现在 PolyJet 试剂在免费发放试用装,你也可以申请。

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*温馨提示:PolyJet 为 DNA 转染试剂,如需 siRNA 转染或共转染的试用请联系我们。

试一下,又不会怀孕!

图文来源:SignaGen

题图来源:站酷海洛

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