Western Blot定量——面积法

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Western Blot定量——面积法

背景介绍

  蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

  蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所的Harry Towbin在1979年提出的。在尼尔·伯奈特于1981年所著的《分析生物化学》中首次被称为Western Blot。蛋白免疫印迹是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。(——来自《百度百科》)

  今天我们主要来讲一下,蛋白条带中蛋白表达的半定量分析,也就是将蛋白条带进行数值化。这里又涉及到一个知识,就是什么是半定量分析,随手百度一下:Western Blot定量——面积法

  也就是说,将蛋白的真正的含量,通过拍照转换为一定的灰度值,使用软件测量其数值,这个过程就属于半定量分析。

软件

ImageJ 或者FIJI

Western Blot定量——面积法

(公众号回复:ImageJFIJI即可获取软件,公众号菜单栏即可获得安装和使用教程)

图文介绍

1.双击打开ImageJ软件Western Blot定量——面积法

2.打开软件自带的凝胶图片,用这个来做演示Western Blot定量——面积法

Western Blot定量——面积法

3.首先,我们将图片调整为8bitWestern Blot定量——面积法

4.然后调节一下对比度,点击Auto即可,然后点击应用。调整对比度的主要目的还是使得图片中颜色的区分度更明显一点Western Blot定量——面积法Western Blot定量——面积法

5.接下来我们来标记蛋白条带,使用矩形工具框柱蛋白即可Western Blot定量——面积法

6.然后选择Analyze-Gels-Plot lanes(Ctrl+3),即可出现一条曲线Western Blot定量——面积法Western Blot定量——面积法

7.使用直线工具对其封口Western Blot定量——面积法

8.使用魔棒工具进行封口,直线一定要和曲线相交,不然魔棒选中的就是一片Western Blot定量——面积法

9.最终就会出现一组数值Western Blot定量——面积法

10.最终将重复做的实验结果进行分析,就可以获得平行数据,进行作图即可。好啦,今天的教程你学会了吗?赶紧来试试吧!

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